西番莲组织培养培养基

出售状态：已下证
专 利 号 ：已交易,保密
专利类型：发明专利
专利分类：农林牧渔
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详细介绍

技术领域 本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种西番莲组织培养培养基。  背景技术 西番莲(学名：Passiflora caerulea L.)是一种芳香可口的水果，有“果汁之王”的美誉，为多年生常绿攀缘木质藤本植物，株态优美，四季常青，叶型奇特，花色鲜艳，气味芬芳，果实甜酸可口，果实芳香，食用果瓤，酸甜可口。风味浓郁，芳香怡人。西番莲原产于巴西，后来在南美、南非、东南亚各国、澳洲和南太平洋各地区都有种植。由于西番莲的果实形似鸡蛋，果汁色泽如鸡蛋黄并具有菠萝、番石榴、香蕉、芒果、草毒、西瓜、酸梅、甘蔗和桃李等多种水果的的风味，所以又有鸡蛋果、百香果之称。西番莲全身都是宝，据测定，西番莲果实含有超过135种以上的芳香物质，据化学分析测定，西番莲果内维生素A、B、C含量丰富，还含有磷、钙、钾、铁和17种氨基酸、历5种的化合物，营养和药用价值很高。其整、根、叶可以入药，有消炎、止痛、活血强身、降脂降血压等功效，果皮可以加工成饲料。  西番莲果汁中有165种化合物，最适于加工成果汁，或与其它水果(如芒果、菠萝、番石榴、柑橙和苹果等)加工混配成混合果汁，可以显著地提高这些水果汁的口感与香味；西番莲果汁构成特殊香味，有养颜美容、去除疲劳、防衰老、抗高血压的疗效。具有很高的营养价值、经济价值和观赏价值。  西番莲以种子繁育的植株性别表现较迟，用种子繁育实生苗很大程度影响了生产。另外，采用扦插、嫁接等常规的无性繁殖技术成活率又低，不适合西番莲的快速繁殖。因此，通过组培技术快速繁殖西番莲株性一致的优良种苗倍受关注。大量研究表明，西番莲利用组培快繁技术育苗是非常理想的途径，具有保持优良品种的遗传稳定性；生产无病种苗的优点；种苗繁殖迅速等特点。  目前，国内已有许多西番莲组培技术研究报道，在生产应用上也初具规模。但是，西番莲品种繁多，不同的品种对培养基的要求不同，一般工厂化生产同时生产几个品种，如果一个品种使用一种培养基，生产操作难度大，成本高，不利于规模化生产。目前继代培养基重点是芽分化，但能用于生根诱导的芽(即有效芽)却很少，且芽的质量也不好，细弱、矮、黄叶；生根培养基配方很多，但是出根不整齐，不稳定，根系愈伤化，数量少等，由于存在以上问题，西番莲组培育苗成本高，工厂化生产比较困难。在培养基的选择上一般采用基本培养基(MS)和生长调节剂的结合，基本培养基一般设1/2MS、MS、3/2MS等3种，生长调节剂选用IBA(吲哚丁酸)和NAA(萘乙酸)两 种，但是继代培养基和生根培养基的侧重点不一样，如不区分，得到的苗生根率低，根膨化，愈伤组织多，且叶片黄花等，存在很多不足。  发明内容 本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种西番莲组织培养培养基，该培养基包括继代培养基、第一步生根培养基和第二步生根培养基，其中：  每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.25-0.35mg/L、萘乙酸0.15-0.25mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第一步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1-0.2mg/L、吲哚丁酸1.5-2.5mg/L；  (5)其他添加物：活性炭2.0-3.0mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第二步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾1050mg/L、硝酸铵912mg/L、七水硫酸镁176mg/L、磷酸二氢钾111mg/L、氯化钙245mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：吲哚丁酸0.1-0.2mg/L；  (5)其他添加物：活性炭3.0-4.0mg/L；  余量为蒸馏水。  本发明西番莲培养基中的继代培养基的配制方法为：  (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、植物生产调节剂母液；  (2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；  (3)称量白糖和琼脂，其中白糖30g/L，琼脂3.0g/L；  (4)加热白糖和琼脂至完全溶解；  (5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；  (6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5.8；  (7)调好PH值的培养基趁热分装到培养瓶，盖上瓶盖，拧紧；  (8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121.6℃，0.1MPa下灭菌20分钟；  (9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。  本发明西番莲组织培养培养基中的第一步生根培养基的配制方法为：  (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、植物生产调节剂母液、活性炭；  (2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；  (3)称量白糖和琼脂，其中白糖15g/L，琼脂3.2g/L；  (4)加热白糖和琼脂至完全溶解；  (5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；  (6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5.8；  (7)调好PH值的培养基趁热分装到培养瓶，盖上瓶盖，拧紧；  (8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121.6℃，0.1MPa下灭菌20分钟；  (9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。  本发明西番莲组织培养培养基中的第二步生根培养基的配制方法为：  (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、活性炭；  (2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；  (3)称量白糖和琼脂，其中白糖15g/L，琼脂3.4g/L；  (4)加热白糖和琼脂至完全溶解；  (5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；  (6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5.8；  (7)调好PH值的培养基趁热分装到培养袋，用三角架固定，夹紧；  (8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121.6℃，0.1MPa下灭菌17分钟；  (9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。  本发明西番莲组织培养培养基中继代培养的方法为：  (1)先弱光培养7至8天，继代苗切口愈合，顶芽上挺，分化出侧芽， 苗木恢复长势；  (2)然后强光培养8至12天，顶芽侧芽高3厘米以上，叶片舒展，茎干半木质化。此时的芽即可用于生根培养。培养温度保持在25-30℃。  本发明西番莲培养基第一步生根培养的方法为：  (1)暗培养5至7天，生根苗基部膨胀，形成根原基。温度要求比较粗放，不低于15℃即可，最佳温度25-30℃。  (2)此时的生根苗转入第二步生根培养基继续培养。  本发明西番莲培养基第二步生根培养的方法为：  (1)强光培养10至15天，室温培养即可。  (2)此时生根苗高4-5厘米，根系5条以上，叶片舒展，苗茎木质化，即可出圃移植。  与目前现有技术的西番莲组织培养基相比，本发明的优点是：  具体实施方式 下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。  实施例1：  西番莲组织培养培养基，该培养基包括继代培养基、第一步生根培养基和第二步生根培养基，其中：  每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.35mg/L、萘乙酸0.25mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第一步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1mg/L、吲哚丁酸2.0mg/L；  (5)其他添加物：活性炭2.0mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第二步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾1050mg/L、硝酸铵912mg/L、七水硫酸镁176mg/L、磷酸二氢钾111mg/L、氯化钙245mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：吲哚丁酸0.1mg/L；  (5)其他添加物：活性炭3.0mg/L；  余量为蒸馏水。  实施例2：  西番莲组织培养培养基，该培养基包括继代培养基、第一步生根培养基和第二步生根培养基，其中：  每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、 磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.25mg/L、萘乙酸0.15mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第一步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：萘乙酸0.2mg/L、吲哚丁酸1.5mg/L；  (5)其他添加物：活性炭3.0mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第二步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾1050mg/L、硝酸铵912mg/L、七水硫酸镁176mg/L、磷酸二氢钾111mg/L、氯化钙245mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：吲哚丁酸0.2mg/L；  (5)其他添加物：活性炭4.0mg/L；  余量为蒸馏水。  实施例3：  西番莲组织培养培养基，该培养基包括继代培养基、第一步生根培养基和第二步生根培养基，其中：  每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸 5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.30mg/L、萘乙酸0.15mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第一步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1mg/L、吲哚丁酸2.5mg/L；  (5)其他添加物：活性炭2.0mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第二步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾1050mg/L、硝酸铵912mg/L、七水硫酸镁176mg/L、磷酸二氢钾111mg/L、氯化钙245mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：吲哚丁酸0.1mg/L；  (5)其他添加物：活性炭3.0mg/L；  余量为蒸馏水。  实施例4：  西番莲组织培养培养基，该培养基包括继代培养基、第一步生根培养基和第二步生根培养基，其中：  每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.35mg/L、萘乙酸0.25mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第一步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：萘乙酸0.2mg/L、吲哚丁酸2.0mg/L；  (5)其他添加物：活性炭3.0mg/L；  余量为蒸馏水。  每升(L)第二步生根培养基的组分及各组分的含量如下：  (1)大量元素：硝酸钾1050mg/L、硝酸铵912mg/L、七水硫酸镁176mg/L、磷酸二氢钾111mg/L、氯化钙245mg/L；  (2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；  (3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；  (4)植物生长调节剂：吲哚丁酸0.2mg/L；  (5)其他添加物：活性炭4.0mg/L；  余量为蒸馏水。  对比例：  采用1/2MS+IBA的组合，其中IBA浓度为0.3mg/L。  利用上述实施例1和对比例制成的培养基，对西番莲进行组织培养，从下表的结果可以看出，实施例的技术指标远超过对比例。  。

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