(一)技术领域
本发明涉及一种从茯砖茶中提取α-淀粉酶抑制剂的方法。
(二)背景技术
α-淀粉酶抑制剂是一种新型治疗糖尿病和肥胖症的药物，通过抑制人体糖代谢的关键酶α-淀粉酶的生物活性，减少食物中碳水化合物的消化吸收，从而达到降血糖和减轻体重的作用。与其他降糖减肥产品相比，副作用较小，因此开发α-淀粉酶抑制剂对特定人群的降糖及减肥具有较好的应用前景。
茯砖茶是以黑毛茶作为原料，经过筛分、汽蒸、沤堆、压制、发花和干燥等工序加工而成的一种黑茶，分为特制茯砖茶和普通茯砖茶，它们之间的主要区别，在于原料的拼配不同：特制茯砖全部用三级黑毛茶作原料，而压制普通茯砖的原料中，三级黑毛茶只占40～45％，四级黑毛茶占5～10％，其他茶占50％。茯砖茶主要销往甘肃、新疆、西藏等边疆地区，是我国边疆游牧民族生活的必需品。近年来，国内外研究者从不同角度研究了茯砖茶的生物活性，对茯砖茶的减肥、降血脂、抗肿瘤、治疗腹泻等效应进行了探讨，取得了良好的效果，但尚未见有对茯砖茶中α-淀粉酶抑制剂活性物质提取方面的研究报道。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种从特制茯砖茶中提取α-淀粉酶抑制剂的方法，制备工艺简单，成本低，所提取的α-淀粉酶抑制剂有较高的生物活性。
本发明采用的技术方案是：
一种从茯砖茶中提取α-淀粉酶抑制剂的方法，所述方法包括：
(1)将茯砖茶粉碎，所得茶粉加入8～15倍量的40％～60％乙醇水溶液(m：v，茶粉质量以g计，乙醇水溶液体积以mL计)，40℃～60℃恒温提取1～3次、每次1h～3h，合并提取液浓缩至无乙醇味得到浓缩液；所述茯砖茶为市购特制茯砖茶；
(2)将步骤(1)所得的浓缩液用三氯甲烷萃取3～5次，分离取水相溶液用乙酸乙酯萃取3～5次，分离取乙酸乙酯相溶液，减压干燥得到所述α-淀粉酶抑制剂。
优选的，所述茯砖茶粉碎过20～40目筛得到茶粉。
优选的，所述方法如下：
(1)将茯砖茶粉碎过20～40目筛，所得茶粉加入10倍量的55％乙醇水溶液，54℃恒温提取2次、每次105min，合并提取液浓缩至无乙醇味得到浓缩液；
(2)将步骤(1)所得的浓缩液用等体积三氯甲烷萃取4次，分离取水相溶液用等体积乙酸乙酯萃取4次，分离取乙酸乙酯相溶液，减压干燥得到所述α-淀粉酶抑制剂。
本发明从茯砖茶中分离提取出α-淀粉酶抑制剂活性物质主要成分为茯砖茶多酚，多酚含量为60％～75％，该α-淀粉酶抑制剂活性较高，优选条件下对α-淀粉酶的半抑制浓度(IC50)为1.09mg/mL。
本发明有益效果主要体现在：以茯砖茶为原料制备α-淀粉酶抑制剂，制备工艺简单，所得产品对α-淀粉酶有较好的抑制活性，有利于提高茯砖茶的附加值，为茯砖茶进一步开发成保健和功能性食品提供方法。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：α-淀粉酶抑制剂活性的测定
利用3，5-二硝基水杨酸法(DNS法)进行测定，具体如下：将0.2mLα-淀粉酶溶液(用含6.7mmol/L NaCl的pH 6.9、20mmol/L磷酸缓冲液配制)与0.2mL含不同浓度α-淀粉酶抑制剂的提取液混合均匀，并置于37℃水浴中预热15min后，加入0.6mL预热到37℃的10g/L的淀粉溶液。反应5min，立即加入1.0mL DNS显色剂。于沸水中显色5min，冰水浴冷却后用8mL去离子水稀释，取样0.2mL于96孔板，用酶标仪于540nm处测定吸光值。以不加α-淀粉酶抑制剂的试样为对照。α-淀粉酶抑制剂对α-淀粉酶抑制率的计算方法为：
抑制率(％)＝(1-加入抑制剂后α-淀粉酶活性/不加抑制剂α-淀粉酶活性)×100％。
实施例2：以α-淀粉酶抑制剂对α-淀粉酶活性的抑制率为参考的醇提工艺的确定：
根据Box-Behnken中心组合试验设计原理，综合单因素试验结果，选取乙醇浓度、提取时间和提取温度3个对抑制剂提取率影响较为显著的因素，并在单因素试验基础上采用三因素三水平的响应面分析方法。具体实施方法为：取粉碎至20目的特制茯砖茶(购于湖南益阳茶厂，下同)粉3.00g，加入浓度为40％～60％(v/v)的乙醇水溶液30mL，提取1h～2h，提取温度为40℃～60℃，相同条件下提取两次。合并提取液，真空减压浓缩至溶液无醇味，定容至250mL，测定提取液对α-淀粉酶的抑制率。试验分析方案及结果如表1。
表1：试验分析方案及结果
经过Design-Expert软件分析，综合考虑，选择最佳提取工艺条件为：乙醇浓度55％(v/v)，提取温度54℃，提取时间105min。此时得到的酶抑制率平均值为59.86％。
实施例3：α-淀粉酶抑制剂的制备
(1)取粉碎至40目的茯砖茶粉10.0g，加入100mL浓度为55％(v/v)的乙醇，54℃恒温提取105min，相同条件提取两次，合并提取液，低温减压浓缩至70mL；
(2)浓缩液采用等体积三氯甲烷萃取4次，分离取水相溶液用等体积乙酸乙酯萃取4次，分离取乙酸乙酯萃取部位，用旋转蒸发仪低温真空干燥得到α-淀粉酶抑制剂0.71g，对α-淀粉酶的半抑制浓度(IC50)为1.09mg/mL。
实施例4：α-淀粉酶抑制剂的制备
(1)取粉碎至20目的茯砖茶粉10.0g，加入100mL浓度为40％(v/v)的乙醇，40℃恒温提取60min，相同条件提取两次，合并提取液，低温减压浓缩至80mL；
(2)浓缩液采用等体积三氯甲烷萃取4次，分离取水相溶液用等体积乙酸乙酯萃取4次，分离取乙酸乙酯萃取部位，用旋转蒸发仪低温真空干燥得到α-淀粉酶抑制剂0.57g，对α-淀粉酶的半抑制浓度(IC50)为1.12mg/mL。
实施例5：α-淀粉酶抑制剂的制备
(1)取粉碎至40目的茯砖茶粉10.0g，加入100mL浓度为60％(v/v)的乙醇，60℃恒温提取120min，相同条件提取两次，合并提取液，低温减压浓缩至60mL；
(2)浓缩液采用等体积三氯甲烷萃取4次，分离得到水相溶液，采用等体积乙酸乙酯萃取4次，分离取乙酸乙酯萃取部位，用旋转蒸发仪低温真空干燥得到α-淀粉酶抑制剂0.75g，对α-淀粉酶的半抑制浓度(IC50)为1.28mg/mL。
实施例6(对比例)：普洱茶中α-淀粉酶抑制剂的制备
取粉碎至40目的普洱茶粉(购于云南普洱县)10.0g，加入50mL浓度为95％(v/v)的乙醇，60℃恒温提取2h，相同条件提取2次，合并提取液，浓缩至50mL，采用等体积石油醚萃取4次，分离取石油醚萃取部位，用旋转蒸发仪低温真空干燥得到α-淀粉酶抑制剂1.12g，对α-淀粉酶的半抑制浓度(IC50)为5.11mg/mL。
