技术领域：
本发明属于纺织材料技术领域，特别涉及一种用活性PEG制备丝 素纳米颗粒的方法。
背景技术：
丝素蛋白是一种性能优良的生物大分子，丝素蛋白不溶于水、乙 醇等有机溶剂，但经脱胶，溶解于某些中性盐的浓溶液后，透析固化 容易得到粉末、膜、颗粒和凝胶等不同形态的材料。以丝素蛋白为原 料制备的丝素纳米颗粒具有良好的透氧性、药物渗透性、无毒性、无 刺激性，具有良好的生物相容性并可以被生物降解。
制备丝素纳米颗粒的方法主要有乳化法、去溶剂化法、共混膜法、 自组装法、盐析法和机械粉碎法。乳化法需要加入和去除有机溶剂， 残留的有机溶剂可能会引起毒性。去溶剂法是加入天然盐或者乙醇， 再经离心提纯超声过滤冻干等手段得到丝素纳米颗粒，方法较复杂。 共混膜法是将有机溶剂与蛋白质溶液混合后风干成膜，再溶解去除有 机溶剂得到丝素纳米颗粒，但颗粒粒径较大，可达微米级别。机械粉 碎法是利用多次机械粉碎制得纳米颗粒，方法时间长，粒径不可控。
自组装法是目前较有发展前景的方法，当体系拆分成相应的亚单 元时，在一定的条件下，这些亚单元会重新混合组合成完整结构。丝 素蛋白质自组装主要依靠氢键、静电相互作用、疏水作用等次级键的 作用组成丝素纳米颗粒。
发明内容：
本发明的目的是提供一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法， 该方法利用酶降解控制丝素蛋白分子量的分布，并利用活性PEG溶 液促进丝素蛋白自组装，得到的丝素颗粒粒径小，分布均匀，安全无 毒。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法，包括以下步骤：
(1)将蚕丝进行脱胶、溶解、透析处理后得到丝素蛋白溶液，再 稀释，加入酶溶液，得到降解的丝素蛋白溶液；
(2)将降解的丝素蛋白溶液中加入硼酸钠，低温处理，与活性 PEG溶液混合均匀，室温静置，去除上清液，得到丝素纳米颗粒溶液；
(3)将丝素纳米颗粒进行离心洗涤干燥，得到单分散性较好的丝 素纳米颗粒。
作为上述技术方案的优选，步骤(1)所述的丝素蛋白溶液浓度 为0.5-3％。
作为上述技术方案的优选，步骤(1)所述的蛋白酶为弹性蛋白 酶，酶解时间为2-20min。
作为上述技术方案的优选，步骤(1)所述的降解的丝素蛋白分 子量为20-100kDa。
作为上述技术方案的优选，步骤(2)所述的硼酸钠的质量为 0.4-0.6g。
作为上述技术方案的优选，步骤(2)所述的低温的温度为4-8℃。
作为上述技术方案的优选，步骤(2)所述的活性PEG溶液质量 分数为2-5％。
作为上述技术方案的优选，步骤(2)所述的混合方法为超声处 理，处理时间10-30min。
作为上述技术方案的优选，步骤(3)所述的洗涤溶剂为乙醇。
作为上述技术方案的优选，步骤(2)所述的丝素纳米颗粒的粒 径为249-681nm。
本发明的有益效果在于：利用酶降解可有效控制丝素分子量的分 布，利用活性PEG可促进丝素蛋白进行自组装形成纳米颗粒，得到 的丝素颗粒粒径小，分布均匀，安全无毒。本发明方法中并未涉及有 毒物质，对环境友好，生态环保。
具体实施方式：
为了加深对本发明的理解，下面结合实施例对本发明作进一步详 述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
实施例1：
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶，溴化锂溶液溶解，透析袋透析处理后得 到浓度为3％的丝素蛋白溶液，再将浓度稀释至1％后，加入弹性蛋 白酶溶液，酶解20min，得到分子量为70-100kDa的丝素蛋白溶液；
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.6g的硼酸钠，调节温度至4℃， 与质量分数为5％的活性PEG溶液用超声处理30min混合均匀，室温 静置12小时，去除上清液，得到丝素纳米颗粒溶液；
将丝素纳米颗粒溶液进行离心，乙醇洗涤，干燥得到平均粒径为 681nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
实施例2：
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶，溴化锂溶液溶解，透析袋透析处理后得 到浓度为0.5％的丝素蛋白溶液，再将浓度稀释至0.1％后，加入弹性 蛋白酶溶液，酶解2min，得到分子量为15-20kDa的丝素蛋白溶液；
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.4g的硼酸钠，调节温度至8℃， 与质量分数为2％的活性PEG溶液用超声处理10min混合均匀，室温 静置12小时，去除上清液，得到丝素纳米颗粒溶液；
将丝素纳米颗粒溶液进行离心，乙醇洗涤，干燥得到平均粒径为 249nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
实施例3：
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶，溴化锂溶液溶解，透析袋透析处理后得 到浓度为1％的丝素蛋白溶液，再将浓度稀释至0.3％后，加入弹性蛋 白酶溶液，酶解5min，得到分子量为40-60kDa的丝素蛋白溶液；
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.5g的硼酸钠，调节温度至5℃， 与质量分数为3％的活性PEG溶液用超声处理20min混合均匀，室温 静置12小时，去除上清液，得到丝素纳米颗粒溶液；
将丝素纳米颗粒溶液进行离心，乙醇洗涤，干燥得到平均粒径为 452nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
实施例4：
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶，溴化锂溶液溶解，透析袋透析处理后得 到浓度为2％的丝素蛋白溶液，再将浓度稀释至0.5％后，加入弹性蛋 白酶溶液，酶解10min，得到分子量为30-57kDa的丝素蛋白溶液；
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.4g的硼酸钠，调节温度至6℃， 与质量分数为4％的活性PEG溶液用超声处理30min混合均匀，室温 静置12小时，去除上清液，得到丝素纳米颗粒溶液；
将丝素纳米颗粒溶液进行离心，乙醇洗涤，干燥得到平均粒径为 375nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
实施例5：
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶，溴化锂溶液溶解，透析袋透析处理后得 到浓度为1％的丝素蛋白溶液，再将浓度稀释至0.2％后，加入弹性蛋 白酶溶液，酶解20min，得到分子量为小于20kDa的丝素蛋白溶液；
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.4g的硼酸钠，调节温度至4℃， 与质量分数为3％的活性PEG溶液用超声处理30min混合均匀，室温 静置12小时，去除上清液，得到丝素纳米颗粒溶液；
将丝素纳米颗粒溶液进行离心，乙醇洗涤，干燥得到平均粒径为 327nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
